羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體檢查

• 專科分類： 孕產(chǎn)檢查
• 檢查分類： 基因檢測(cè)（DNA）
• 適用性別： 女性
• 是否空腹： 　空腹
• 手術(shù)參考價(jià)： 150元
• 科　室： 孕產(chǎn)檢查

羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體檢查的測(cè)定原理：羊水細(xì)胞是胎兒皮膚、消化道、呼吸道和經(jīng)生殖泌尿系統(tǒng)脫落的細(xì)胞，95%左右是死細(xì)胞，因此必須經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)，使活的細(xì)胞得到充分的增殖，才能收獲細(xì)胞，進(jìn)行核型分析。

試劑：①F10培養(yǎng)液（如用RPMI1640，M199需加1mmol/L谷氨酰胺）pH6.5～6.8。②小牛血清。③Hanks平衡鹽溶液（10倍濃縮）：甲液：NaCl80g，KCl4g，MgSO4·7H2O1g，MgCl2·6H2O1g，CaCl2·6H2O1.4g。將CaCl2溶于50ml三蒸水中，其它依次溶于400ml三蒸水中，兩液混合，加三蒸水至500ml，加氯仿1ml混勻，保存于4℃冰箱中。乙液：Na2HPO4·12H2O1.52g，KH2PO40.6g，葡萄糖10.0g，4g/L酚磺酞液50.0ml。依次溶于三蒸水400ml中，加三蒸水至500ml，加入氯仿1ml混勻，保存于4℃冰箱。Hanks平衡工作液：甲液1份，乙液1份，雙蒸水18份，混合后高壓滅菌，置4℃冰箱保存。使用前以50g/LNaHCO3溶液調(diào)至適當(dāng)pH。④4g/L酚磺酞液：酚磺酞0.4g置研缽中研碎，逐滴加入0.05mol/LNaOH22ml。

直到所有顆粒幾乎完全溶解，加入三蒸水至100ml，置棕色瓶中保存。⑤2.5g/L胰蛋白酶溶液：稱取胰蛋白酶250mg，溶于100mlHanks溶液中，過濾除菌，或用無鈣、鎂離子溶液配制。⑥無鈣、鎂離子溶液：NaCl8.0g，KCl0.2g，枸櫞酸鈉1.0g，NaH2PO4·H2O0.05g，NaHCO31.0g，葡萄糖1.0g。依次溶于三蒸水中，最后加三蒸水至1000ml，過濾除菌，貯存于4℃冰箱中備用。⑦EDTA胰蛋白酶溶液：貯存液：NaCl80g，KCl4g，葡萄糖10g，NaHCO35.8g，胰蛋白酶5.0g，EDTA2.0g。依次溶于900ml三蒸水中，并加4g/L酚磺酞5ml，加三蒸水至1000ml，抽濾除菌、分裝，凍存?zhèn)溆谩９ぷ饕海喝≠A存液1ml，加無菌三蒸水9ml即可。⑧雙抗溶液。⑨秋水仙素（10μg/ml）。

操作方法：

（1）取孕期16～20周羊水15～30ml，1000r/ml離心10min。

（2）棄去多余上清液，留1ml羊水和沉淀細(xì)胞，輕輕打散成細(xì)胞懸液。

（3）移入25ml方形培養(yǎng)瓶中，加pH6.5～6.8（含青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml）的培養(yǎng)基3ml及小牛血清1ml，置37℃溫箱中培養(yǎng)。

（4）培養(yǎng)7～10天后可見大量成纖維樣或上皮樣細(xì)胞集落。此時(shí)可調(diào)換新鮮培養(yǎng)液。

（5）待細(xì)胞集落擴(kuò)大成片，并有許多透亮的圓形分裂細(xì)胞時(shí)，即可加入秋水仙素，使最終濃度為0.1～0.3μg/ml，置37℃溫箱中再培養(yǎng)5～6h（上述過程均在無菌條件下進(jìn)行）。收獲標(biāo)準(zhǔn)：①以成纖維細(xì)胞為主要類型，成片細(xì)胞生長(zhǎng)；②以10倍目鏡和20倍物鏡觀察，生長(zhǎng)的細(xì)胞克隆覆蓋1個(gè)或1個(gè)以上完整視野；③見到10個(gè)以上透亮的圓形細(xì)胞和10個(gè)以上雙圓形光亮的分裂細(xì)胞。

（6）如果細(xì)胞生長(zhǎng)不旺盛，生長(zhǎng)周期不齊或細(xì)胞老化，未達(dá)收獲標(biāo)準(zhǔn)，可在原瓶繼續(xù)傳代培養(yǎng)。方法：在無菌條件下先倒去培養(yǎng)液，加入2.5g/L無菌胰蛋白酶液數(shù)滴，搖動(dòng)后倒去。再加入胰蛋白酶5～10滴，在37℃下輕輕搖動(dòng)約5min，使貼壁細(xì)胞脫落。加入含小牛血清的新鮮培養(yǎng)基4ml，在37℃靜置培養(yǎng)4～5h。再小心更換培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，一般傳代后3～5天即可收獲。

（7）將培養(yǎng)液移至刻度離心管中，加ED-TA-胰蛋白酶液1ml于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，置37℃溫箱中5min，然后用彎頭吸管沖洗貼壁細(xì)胞（也可用2.5g/L胰蛋白酶溶液消化）。將脫離瓶壁的細(xì)胞倒入離心管中，與原培養(yǎng)液相混合，并用少量溫?zé)嵘睇}水沖洗培養(yǎng)瓶，洗下的細(xì)胞也一并倒入該離心管，以1000r/min離心10min。

（8）吸棄上清液，加入預(yù)溫37℃的0.075mol/LKCl低滲液3～5ml，置37℃10～15min。

（9）預(yù)固定、固定及制片均與外周血細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備法相同。